Иммуноблоттинг – диагностическое мероприятие, проводимое в лабораторных условиях, по результатам которого выявляют антитела к возбудителям различных заболеваний. Одним из таковых выступает вирус иммунодефицита человека. Сразу стоит отметить, что такое исследование, как иммуноблоттинг на ВИЧ – это дополнительное мероприятие, которое назначают для подтверждения положительного результата ИФА.
Содержание:
В каких случаях назначается анализ
Вирус иммунодефицита человека – медленно прогрессирующая инфекция. Со времени проникновения в организм патогенов и до проявления первой симптоматики часто проходит достаточно продолжительное время, которое может достигать нескольких лет.
На начальном этапе развития клинические проявления могут отсутствовать. Повышение общей температуры, недомогание, боль в горле, характерные ВИЧ-инфекции симптомы, человек путает с банальной простудой, а ведь инфекция продолжает прогрессировать. Поэтому специалисты ВИЧ-центров рекомендуют пройти комплексную диагностику в таких случаях:
- если случился незащищенный половой акт с новым партнером;
- если одноразовый медицинский шприц или иглу использовали повторно;
- если недавно была нанесена татуировка или проведен пирсинг;
- если обнаружена другая инфекция, путь передачи которой – половой (например, сифилис, бактериальный вагиноз, гонорея);
- если произошел контакт с инфицированным человеком.
Иммуноблот на ВИЧ проводится с использованием сыворотки или плазмы крови. Исследование на одном стрипе требует 1,5-2 мл крови или 15-25 мкл сыворотки.
Диагностическое мероприятие позволяет выявить антитела не только к вирусу иммунодефицита человека, но и к другим патогенам. В ходе исследования используют специальные наборы, характерные для различных заболеваний, например:
- ВПГ1 и ВПГ2 IgM/IgG (для выявления герпесвирусной инфекции);
- TORCH-профиль IgM (для выявления токсоплазмоза, краснухи, цитомегаловирусной инфекции, ВПГ 1 и ВПГ 2);
- ВЭБ IgMTIgG (для выявления вирусной инфекции Эпштейн-Барр);
- ВГС IgG (для выявления вирусного гепатита типа С).
Результат иммуноблоттинга может быть положительным (когда обнаружены антитела) и отрицательным (когда антитела в биологическом материале отсутствуют), а также неопределенным, ложноположительным и ложноотрицательным.
Где можно провериться на заражение вирусом, и что делать дальше
Каждая поликлиника, частная лаборатория, больница, клиника специализируется на подобном диагностическом мероприятии. Пройти тест можно в центре тестирования ВИЧ. Некоторые частные клиники предлагают услуги по консультированию и тестированию вируса СПИДа и ВИЧ на дому.
Рекомендуется провести один тест спустя 6 недель после предполагаемого заражения и спустя 12 недель. Пройти диагностику разрешается и в более поздний срок: на результат это не влияет.
ВАЖНО! После получения результатов исследования нужно обратиться к лечащему врачу для назначения соответствующей терапии.
Положительные пробы
Если результаты иммуноблота положительные, это еще не значит, что в организме развивается ВИЧ-инфекция. Для подтверждения диагноза назначают иные исследования, например, непрямую иммунофлюоросценцию.
Хоть метод иммуноблота и обладает высокой чувствительностью, однако, за счет определения иммуноглобулинов класса G возможен ложноположительный результат в первые 3 недели после инфицирования. В таком случае проводится тест повторно спустя определенное время.
Все причины получения ложноположительного результата неизвестны. Наиболее распространенными источниками выступают период беременности и недавнее введение вакцины иммунопрепарата. Если по истечении определенного времени после воздействия подобных факторов иммуноблот на ВИЧ все так же положительный, это означает, что человек инфицирован.
Негативный результат
Иммуноблот может давать отрицательный результат, что сигнализирует об отсутствии в организме антител к ВИЧ-инфекции и, как следствие, — о полном здоровье.
Отрицательный иммуноблот часто наблюдается в «период окна» (в первые 3 месяца между инфицированием и появлением в крови антител). На протяжении данного срока тест не обнаруживает соответствующие антитела, но в иной жидкости (сперме, влагалищном отделяемом) можно выявить таковые и в большом объеме.
Как проводится анализ
Иммуноблот позволяет идентифицировать антитела путем исследования крови и применения гель-электрофореза.
В первую очередь проводится разрушение бактериальных клеток или вирионов ультразвуком, после чего путем электрофореза – разделение всех антигенов вируса или бактериальных клеток. В итоге получается коммерческий реагент, помещаемый на специальную нитроцеллюлозную пленку.
Во время постановки иммуноблоттинга на материал с известным антигеном наносят и исследуемую сыворотку. После того, как провели инкубацию и отмывание несвязавшихся антител, начинают иммуноферментный анализ, наносят на сыворотку иммуноглобулины, которую помечают ферментом, и хромогенный субстрат, меняющий цвет при контакте с ферментом.
Если имеются антитела, на носителе образуются пятна.
Линейный метод
Линейный блот на ВИЧ – непрямое иммунологическое исследование, методом которого получают качественный показатель аутоантител класса IgG.
В ходе иммунологического исследования используют вирусное вещество ВИЧ-формата или антигены. В лабораторных условиях соединяют белки ВИЧ и отдельные антитела, которые были получены из сыворотки крови. Далее проводится инкубация путем добавления меченых антител и человеческого иммуноглобулина.
Диагностика ВИЧ у новорожденных
В организме ребенка до 9 месяцев, рожденного от инфицированной женщины, присутствуют антитела к ВИЧ матери, что становится причиной получения ложноположительного результата ИФА. По этой причине предпочтение отдают вирусологическим тестам – количественному анализу РНК и ДНК ПЦР. Более чувствителен культуральный метод диагностики инфекции.
ВАЖНО! Показаниями к проведению диагностических мероприятий по выявлению ВИЧ-инфекции у новорожденных выступают: рождение от инфицированной женщины, получение сомнительного результата ранее осуществимого анализа.
Исследование при беременности
Так как ВИЧ-инфекция, развивающаяся у беременной женщины, может передаться будущему ребенку, требуется ранняя диагностика на вирус иммунодефицита.
В первую очередь проводится иммуноферментный анализ, применяемый в качестве скрининга. Диагностическое мероприятие помогает обнаружить в сыворотке крови антитела к инфекции. Несмотря на точные результаты анализа в период беременности, требуется повторное проведение исследования.
Разновидность ИФА – иммунный блоттинг, который часто используют в период беременности. По результатам диагностики можно выявить антитела к определенным антигенам, которые распределены по молекулярному весу методом электрофореза.
Как правильно пройти тест
Иммунный блоттинг на ВИЧ требует специальной подготовки, как и другие методы диагностики заболевания. Если провести некоторые исследования и получить результаты определенных показателей можно на протяжении всего дня (например, ответ на аллерген), то сдавать кровь на иммунологический анализ нужно только в утреннее время.
В предыдущий день перед диагностикой рекомендуется окончить повышенные физические нагрузки. Биологический материал сдают на голодный желудок. Как правило – это кровь с вены, которую в некоторых случаях забирают в несколько пробирок.
Расшифровка результатов
Расшифровку результатов иммуноблотта проводит лабораторный работник. Если обнаружили 2 из 3 протеинов ВИЧ-1 или ВИЧ-2, это указывает на присутствие в организме соответствующей инфекции. Исследование проводится для подтверждения положительного иммуноферментного анализа. Поэтому реакция проверяется и на такие протеины, как gp120/160, gp41 в сочетании с р24. Последние – это часть трех генов СПИДа — gag pol and env.
Первичная диагностика предполагает исследование белков р25, gp110/120 и gp160, указывающих на раннюю стадию развития заболевания. При положительном результате, который дал второй серологический иммуноферментный анализ, проводится иммуноблот. Если и последний дал положительный результат, диагноз ВИЧ подтверждают.
Вероятность положительного результата зависит от периода, который прошел от момента инфицирования до проведения диагностики:
- спустя 28 дней – 60-65%;
- спустя 42 дня – 80%;
- спустя 56 дней – 90%;
- спустя 84 дня – 95%.
Ложноположительный результат возможен, если забор биологического материала для дальнейшей диагностики проводился в период беременности, при нарушении гормонального фона, продолжительном подавлении иммунной функции определенными препаратами, которые принимает человек.
Критерии оценки анализа
Результаты анализа ИФА и иммуноблоттинга должны соответствовать следующим критериям:
- блот исследуемого биологического материала совпадает с блотом образца сравнения;
- молекулярная масса основного выявленного компонента соответствует требованиям спецификации.
Выявляемая примесь и ее содержание должны отвечать требованиям свидетельства на стандартный образец.
Неинтерпретируемые результаты
В некоторых случаях иммуноблоттинг на ВИЧ и СПИД не соответствует отрицательному и положительному результату, причем врач не может определить истинную причину сомнительных сведений. Часто причиной неправильной интерпретации выступает инфицирование, вызванное другим серотипом.
Для устранения сомнений ПЦР и ИФА проводятся в динамике. При отсутствии характерной заболеванию симптоматики на протяжении полугода и факторов риска говорят о полном здоровье. На этом этапе диагностические мероприятия оканчивают.
Сомнительный результат также можно получить при развитии в организме иного инфекционного заболевания, ракового новообразования, аллергической реакции.
Важно! При сомнительном результате человек не может быть донором крови и другого биологического материала.
Типичные ошибки при диагностике ВИЧ инфекции
Забор биологического материала, доставка и оформление материалов, используемых при проведении лабораторной диагностики, должны соответствовать следующим правилам:
- Сопроводительная документация оформляется с указанием наименования тест-системы, ее срока годности и серии.
- Полностью указаны паспортные данные обследуемого, дата, место забора биологического материала.
- Сыворотка хранится не дольше установленного срока, для исследования берется допустимый объем биоптатат – не меньше 2-5 мл.
- Номер на флаконе соответствует указанному номеру в направлении.
- Забор биологического материала происходит по установленным правилам, а именно, из локтевой вены. В составе исследуемой крови не должно быть сгустков.
Для забора материала используется сухая пробирка. У новорожденных часто берут пуповинную кровь, указывая о таком факте в направлении.
Типичная ошибка врачей – хранение полученного материала дольше 12 часов при комнатной температуре и дольше 1 дня при температуре 4-8 градусов выше по Цельсию. За счет наступающего гемолиза искажаются результаты диагностического мероприятия.
Итак, к типичным ошибкам во время проведения диагностики ВИЧ-инфекции относят:
- неправильный забор биологического материала;
- неправильное хранение биоптата;
- неправильная транспортировка диагностических систем;
- длительное хранение тест-системы.
На результат влияет даже качество воды, используемой для промывания тары, в которую помещают биологический материал.
После получения результатов исследования лабораторный работник должен выдать для врача заключение. Если диагностика проводилась в «период окна», он назначает повторное проведение диагностики спустя определенное время. В любом случае, чтобы поставить диагноз «ВИЧ-инфекция», одного иммуноблота недостаточно. Необходима комплексная диагностика.
